Lisaks olid enamik rakke RGC-d, kuigi me täheldasime segakultuuris teisi võrkkesta rakutüüpe amakriinrakke, astrotsüüte, Mülleri rakke, mikroglia, bipolaarseid rakke; täiendavaid jooniseid S1a — h. Need tähelepanekud suurendavad võimalust, et p53, hüpoksiaga indutseeritav faktor 1 ja E2F1 võivad kõik toimida FoxO3 geeni ekspressiooni kontrollimisel. Lisaks soodustaks tulevaste katsete kavandamine multifaktoriaalse lähenemisviisi abil RGCde ellujäämist veelgi. On võimalik, et p53 hõivatus erinevates kohtades sõltub rakutüübist või konkreetsetest keskkonnatingimustest. Need andmed näitavad, et Nrn1 võib mängida olulist rolli neuronaalse diferentseerumise ja ellujäämise, samuti neuriitide väljakasvu ja aksonaalse regenereerimise juures.
Neurodegeneratiivsed haigused Abstraktne Neuritiin 1 Nrn1 on ekstratsellulaarne glükofosfatidüülinositooliga seotud valk, mis stimuleerib kesknärvisüsteemi CNS aksonaalset plastilisust, dendriitide arboriseerumist ja sünapsi küpsemist. Selle uuringu eesmärk oli hinnata Nrn1 neuroprotektiivseid ja aksogeenseid omadusi in vitro aksotomeeritud võrkkesta ganglionrakkudel RGC-d ja in vivo nägemisnärvi purustamise ONC hiiremudelil.
Kokkuvõttes näitas Nrn1 neuroprotektiivset, regenereerivat toimet ja säilinud RGC funktsiooni aksotomeeritud RGC-dele in vitro ja pärast aksonaalset vigastust in vivo.
Nrn1 on kesknärvisüsteemi neurodegeneratiivsete haiguste potentsiaalne terapeutiline sihtmärk. Main Kesknärvisüsteemi CNS trauma ja neurodegeneratiivsed häired vallandavad sisemiste ja väliste rakuliste sündmuste kaskaadi, mille tulemuseks on regeneratiivne ebaõnnestumine ja järgnevad neuronite kahjustused.
Samamoodi korreleeruvad välised tegurid Race Waling Fat Loss inhibeerimisega, mis on tingitud inhibeerivatest märkidest 3, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, mis sisaldavad müeliini ja müeliiniga seotud inhibiitoreid, gliaarsete armistumist, 5, 14 aeglast aksonaalse prahi kliirensit, 7 neuronaalsete projektsioonide 6 ja kesknärvisüsteemi põletiku ebaõige areng.
Regeneratiivne ebaõnnestumine on nende destruktiivsete vallandajate kriitiline lõpp-punkt, mis kulmineerub neuronite apoptoosiga 3, 20, 21 ja funktsionaalse taastumise inhibeerimisega.
Aksonaalset regeneratsiooni mõjutavad sisemised tegurid pärast kesknärvisüsteemi kahjustust on taastumise seisukohast otsustava tähtsusega ja seega võivad aksonaalses plastiilsuses ja kasvus osalevate geenide düsreguleerimine osutuda neuronite taastumist kahjustavaks. Lisaks on PN-d, mis on siirdatud ON-de kõrvale, ex vivo PN-transplantaadid lenti-viiruse transdutseeritud Schwann-rakkudega ja põletikuliste protsesside stimuleerimisega, kahjustatud RGC-dele tugevalt taastuv. CNTF-i manustamine autoloogsetele PN-transplantaatidele, mis on siirdatud transformeeritud ON suurenenud regenereerimisele, kuid need toimed Kaalulangus Poopingi ajal oluliselt pärast makrofaagide eemaldamist sellelt saidilt.
Seega on teised uuringud Rasva kadu hopkinton ma RGC ellujäämist ja aksonite regenereerimist CNTF ja teiste kasvufaktoritega, 35, 36, kuid enamik trofilisi tegureid mõjutavad neuronaalset ellujäämist ja regeneratsiooni erinevalt.
Varasemad uuringud, mis on suunatud neuronaalsele apoptoosile sisemiste kasvufaktorite üleekspresseerimise, apoptoosi pärssimise ja kesknärvisüsteemi trauma mudelite regenereerimise suurendamise kaudu, on näidanud, et edukate ja pikaajaliste terapeutiliste tulemuste saavutamiseks on vaja mitmefaktorilist lähenemist.
Üks neuronaalse plastilisusega seotud võtm geen on Neuritin 1 Nrn1mida tuntakse ka kandidaatplastilisuse geenina Sellel on mitu funktsiooni ja see identifitseeriti ja iseloomustati esmalt kandidaatide poolt aktiveeritud hippokampuse dentaat-geenide kandidaatplastilisuse geenide sõelumisel.
Nrn1 stimuleerib kesknärvisüsteemis aksonaalset plastilisust, dendriitide arboriseerumist ja sünapsi küpsemist. Nrn1 võib olla neuroprotektsiooni ja regeneratsiooni oluline geen, sest kasvufaktorid, nagu närvi kasvufaktor NGFBDNF ja NT-3, samuti neuronaalne aktiivsus võivad võimendada Nrn1 ekspressiooni. Kesknärvisüsteemi trauma ületamiseks on vaja uut ravi, mis on suunatud neuroprotektsiooni ja efektiivse aksonaalse regenereerimise suunas, et suurendada tulevast multifaktorilist lähenemist.
Oleme tuvastanud selge neuroprotektiivse ja regeneratiivse strateegia, mis takistab neurodegeneratsiooni pärast ON vigastust.
Tulemused Rekombinantne hNRN1 suurendab in vitro RGC neuroprotektsiooni ja neuriidi kasvu Meie segatud võrkkesta rakukultuuri iseloomustasid erinevate võrkkesta rakutüüpide markerid täiendav tabel S1 täiendavad joonised S1a — h. Nende kultuuride RGC-de tuvastamiseks kasutasime kahte erinevat markerit. Lisaks olid enamik rakke RGC-d, kuigi me täheldasime segakultuuris teisi võrkkesta rakutüüpe amakriinrakke, astrotsüüte, Mülleri rakke, mikroglia, bipolaarseid rakke; Rasva kadu hopkinton ma jooniseid S1a — h.
Pärast töötlemist näitasid rakkude faasikontrastsed kujutised rakkude tugevat kasvu joonised la ja b. A kontrolli ja b ravi faasi kontrastsed kujutised. Rbpms c kontrolliga ja d töötlemisega immuniseeritud märgistatud dissotsieerunud RGC-de fluorestsentsmikrograafid ja DAPI e kontroll ja f töötlemine.
Fotomikrograafid võeti kordse suurendusega. Väärtused esindavad viie kujutise keskmist süvendi kohta kolme sõltumatu katse kohta rühma kohta.
Neuriit ja tuumareaktsioonid joonised 2c ja d näitasid ka RGC-des pärast töötlemist kõrgema neuriidi jälgimise mustri. Töödeldud Rbpms-positiivsed tuuma- ja Nefl-neuronaalsed jälgimised c kontrollis ja d NRN1-ga töödeldud rakkudes. E neuriitide keskmise pikkuse kvantifitseerimine ühe RGC kohta, nagu on kirjeldatud punktis a - d. Väärtused esindavad Rbpms-positiivsete rakkude koguarvu ja kogu neuriitide pikkust μ m nelja juhusliku pildi puhul, mis on võetud 39 μm 2 pindalaga 15 süvendi kohta neljast sõltumatust katsel rühma kohta.
Naiivsetes võrkkestades ei täheldatud ekspressiooni joonis 3a. Väljendit hoiti 6 nädalat pärast süstimist joonised 3c — e. In situ hübridisatsioon viidi läbi võrkkesta lõigudega, mis olid testitud NRN1 jaoks.
Võrkkesta lõigud a ei ole varem, b 2 nädalat, c 3 nädalat, d 4 nädalat ja e 6 nädalat pärast intravitreaalset süstimist. Fotomikrograafid võeti kordse suurendusega Täissuuruses pilt NRN1 üleekspressiooni kinnitati ka immunohistokeemilise IHC värvimisega. Kuna NRN1 on sekreteeritav valk, täheldati ka sisemist ja välimist plexiformi kihti 43 kerge ekspressioon joonis 4a. Sarnaselt suurenes ON-s ekspressioon 2 nädalat pärast intravitreaalset süstimist IVT võrreldes varem süstimata kontrollsilmadega ja immunoreaktiivsust hoiti 3 nädalat joonis 4b.
Abstraktne
Fluorestsentsmikrograafid näitavad hNRN1 üleekspressiooni pikisuunalisel a võrkkesta, b võrkkestal Rasva kadu hopkinton ma ON ning c ja d SC koronaalosadel. Ajapunkt pärast süstimist näidatakse paneeli peal. Fotomikrograafid salvestati × kordse suurendusega Täissuuruses pilt Selleks, et määrata, kas transgeeni valgud olid visuaalse tee kaudu transportitud, testisime GFP ja hNRN1 ekspressiooni ülemises kollektsioonis SC.
Närilistel sisestab enamik võrkkesta sisendit vastassuunalisse SC-sse, millel on väikese inervatsiooniga ipsilateraalne SC.
AAV2 — hNRN1 vahendas neuroprotektsiooni ja aksonaalse taastumise pärast aksonaalset traumat RGC ellujäämise analüüsimiseks uuriti võrkkesta lõigud Rbpms immunoreaktiivsuse suhtes ora serrata'st ora serrata'ni läbi hiire silmade keskse piirkonna joonis 5a. Kaks nädalat hiljem viidi loomad ONC-le ja kogu silmad koristati 7, 14, 21 ja 28 päeva pärast purustamist. Gap43 immunoreaktiivsus meie kontrollrühmas näitas ekspressiooni mustrid, mis olid sarnased teiste aksonaalse vigastuse uuringutes eelnevalt täheldatuga.
Gap43 suurenenud ekspressioon tähendab suurenenud regenereerimist, mis on tingitud üleekspresseeritud NRN1-st võrreldes kontrollidega. Kaks nädalat hiljem allutati loomadele nägemisnärvi purustamine ja kogu silmad Rasva kadu hopkinton ma 28 päeva pärast purustamist.
Võrkkesta lamedates alustes tähistab punane Nefm ja roheline on Gap Punktijoon tähistab purunemispaika igas ON pildis. Fotomikrograafid salvestati × a ja b ja × c ja d originaalsuurendusega. See näitab, et hNRN1 üleekspressioon põhjustab märkimisväärset regeneratiivset toimet, mis võimaldab efektiivset CTB transporti läbi RGC-aksonite, mis ületavad purustamiskoha.
Kasv näitas regeneratsiooni edendamist RGC-de aksonites. Iga ajapunkti representatiivsed amplituudid ja graafikud on esitatud joonisel S4. See viitab sellele, et ellujäänud RGC-d kutsuvad esile efektiivse funktsionaalse vastuse, mis säilitab algväärtustega sarnased amplituudid.
Kaks nädalat hiljem analüüsiti loomad ONC ja fERG-ga algtasemel enne purustamist ja 7, 14, 21 ja 28 päeva pärast purustamist. Lisaks soodustas hNRN1 üleekspressioon in vivo RGC-de ellujäämist ja taastas vigastatud aksonite Rasva kadu hopkinton ma võime. Lõpuks säilitasid säilinud neuronid funktsionaalse valgusreaktsiooni pärast ON vigastust, nagu on näidanud fERG. Rekombinantne hNRN1 suurendab neuroprotektsiooni ja neuriitide väljakasvu aksotomeeritud RGC-des Funktsionaalselt toimib Nrn1 insuliiniretseptori ligandina 60 ja GPI ankuri lõhustamine fosfolipaas C abil võimaldab sekreteerida lahustuvat vormi ja aktiveerida allavoolu radasid.
Selline suurenenud neuriitide väljakasvumine toimub mitogeeni aktiveeritud proteiinkinaasi või fosfatidüülinositool-3 kinaasi aktiveerimise kaudu. Lisaks on varasematest uuringutest teatatud NRN1 regenereerivast rollist, kus see on neuriidi väljakasvu allavoolu efektor. Nrn1 vaigistamine siRNA abil kaotas NGF-vahendatud neuriitide väljakasvu eksperimentaalses diabeetilises neuropaatia mudelis, näidates Nrn1 otsustavat mõju regeneratsioonile.
Lisaks näitasime, et Nrn1 eksponeerib pärast aksonaalset solvangut kahefaasilise ekspressioonimustriga.
Hopkinton MA Fire Department Recruitment Video
Axotomized RGC-d suurendavad esialgu Nrn1 ekspressiooni, püüdes esile kutsuda aksonaalset regeneratsiooni ja ületada takistatud transpordimehhanismid. Need regeneratiivsed toetavad mehhanismid kaovad 14 dpc võrra, sest siis Rasva kadu hopkinton ma enamik RGC-sid kahjustatud ja nende neuronite ellujäämine on järk-järgult vähenenud.
Lisaks soodustaks tulevaste katsete kavandamine multifaktoriaalse lähenemisviisi abil RGCde ellujäämist veelgi. NRN1 on lahustuv sekreteeritav valk, mis on kavandatud seonduma insuliiniretseptoriga. Retseptor on erinevates rakutüüpides võrkkestas, 70 ja sekreteeritud valk võib potentsiaalselt olla kasulik nii RGC-de mõjutamiseks autokriinselt kui ka teiste parakriinsete rakkude poolt, võttes RGC-dele välise toime.
Lisaks on eelnevalt näidatud, et NRN1 GPI membraaniga seotud ankur võimaldab anda ruumilise spetsiifilisuse ja otsese kasvu edendamise. Need andmed näitavad, et Nrn1 võib mängida olulist rolli neuronaalse diferentseerumise ja ellujäämise, samuti neuriitide väljakasvu ja aksonaalse regenereerimise juures. Varasemad uuringud on näidanud, et ONC-ga kaasnevad aksonaalsed vigastused käivitavad sisemiste Kuidas ma peaksin votma rasvapoleti väliste sündmuste kaskaadi, mille tagajärjeks on neuronite kahjustumine ja järgnev regeneratiivne Rasva kadu hopkinton ma 1, 2, 3, 4, 5, mis põhjustab RGC apoptoosi 72 ja funktsionaalseid defekte.
Neurotroofsete tegurite nagu BDNF rakendamine on näidanud paremat RGC ellujäämist ja funktsioneerimist teistes aksonaalse vigastuse mudelites. Nrn1 exhibits recovery from trauma significantly both in vitro and in vivo which includes RGC survival, axonal regeneration and sustained RGC function without co-deletion of crucial genes such as phosphatase and tensin homolog Pten and Socs3 38 or deletion of Klf4.
Nrn1 gene therapy was aimed to increase survival and regeneration of axotomized RGCs both in vitro and in vivo. Even though oncomodulin and other factors produced by macrophages have been shown to be essential mediators for significantly promoting axonal growth and survival of axotomized RGCs in vitro and in vivo, oncomodulin requires additional agents, which include mannose to elevate cAMP for stimulating axon outgrowth from RGCs.
However, an inflammatory response in the eye could damage other tissues like the lens and retina, and long-term deletion of pten, a tumor-suppressor gene, could be detrimental clinically.
In addition, mao rasvapoleti band studies have been only performed in the ONC model and could be further extrapolated to other CNS trauma models as well as neurodegenerative models. The ONC model is an acute trauma model and the insult is quite extensive with significant death of RGCs observed as early as 14 dpc.
This experimental design enabled effective transduction of RGCs and Rasva kadu hopkinton ma expression of this transgene for promoting survival.
To evaluate the true potential of clinical application, the Rasva kadu hopkinton ma of NRN1 need to be investigated after injury. Local application of exogenous NRN1 has been shown to promote axonal regeneration and recovery in locomotor function in rats after acute spinal cord injury. Encapsulated human cells genetically modified to secrete NRN1 could be implanted in regions of CNS trauma to inhibit neurodegeneration.
The outer membrane of the semipermeable encapsulated cell implant would permit NRN1 to reach the target area and enable application of the treatment after CNS trauma, allowing the exploration of NRN1 overexpression on survival, regeneration and RGC function after injury. In Rasva kadu hopkinton ma, our study discovered a distinct neuroprotective and regenerative strategy to prevent RGC degeneration. Retinal cell culture Isolation and culture of retinal cells was modified from a previously reported protocol.
Pikaajaline geen foxo3 on p53 kasvaja supressori otsene sihtmärk onkogeen | Artiklid
The supernatant was discarded after centrifugation rpm to remove any extra papain. RGC medium was added to the pellet and cells were dispersed into a single cell suspension by pipetting. Medium was replaced every 48 h for the next 10 days. The RGC survival and neurite outgrowth experiments were performed independently.
Each experiment was independently repeated at least three times.
Masked image capture and analysis were performed to remove any bias as to the treatment condition. Cell counts were analyzed using Adobe Photoshop software. Data are presented as mean±SEM of replicate wells. Processing of nuclei and neuron images was compiled using the plugin with normalization and standardization procedures in place. Total neurite length per 39 μ m 2 area was calculated for the control and NRN1-treated cells.
The contralateral eye was left untreated. The ON left was Rasva kadu hopkinton ma and crushed intraorbitally using self-closing forceps to ensure reproducibility and constant force. Extreme care was taken not to damage the ocular blood vessels. Rasva kadu hopkinton ma ophthalmoscopy was performed to ensure retinal circulation was not compromised.
Cross-sections of retina were transferred to Superfrost glass slides Fisher Scientific. Each slide was incubated with the respective primary antibody and incubated overnight at 4 °C.